该过程结合了Clontech特别的SMART(RNA模板5'末端的转换机制)技术,允许反转录酶达到转录本的5'末端。大多数其他RACE PCR方法都没有捕获5'端,因此错过了重要信息。此外,在5'末端添加SMART序列使得该位点能够用于下游扩增和克隆。 SMARTer RACE组分和流程的优化 ...
建库策略 常用的两种方法是mPCR (多重PCR)和5’RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)。 mPCR支持DNA和RNA起始,通常包括两轮PCR。第一轮PCR可扩增出受体基因座,并添加用于二轮PCR引物位点的已知序列,测序接头与index随后整合。然而,第一轮PCR overlap sites的引物位点存在 ...
Poly(A) + mRNA is preferred as a template for all forms of RT-PCR when the target mRNA is expressed ... The success or failure of 5′ RACE is determined here at the beginning of the experiment.